赭曲霉毒素A免疫親和柱的核心在于將高特異性單克隆抗體交聯于瓊脂糖凝膠微球或納米材料表面,形成穩定的抗原-抗體結合位點。當含赭曲霉毒素A的樣品提取液通過柱體時,赭曲霉毒素A分子與固定化抗體發生特異性結合,形成穩定的復合物,而其他雜質則隨流動相被洗脫。這一過程模擬了生物體內的免疫識別機制,實現了對赭曲霉毒素A的靶向富集。
1.預處理:將柱體恢復至室溫,排空保存液,避免溫度或液體殘留影響結合效率。
2.上樣:以1滴/秒的流速將10mL樣品提取液通過柱體,確保赭曲霉毒素A與抗體充分結合。若樣品中赭曲霉毒素A含量超過柱容量,需減少上樣體積或稀釋樣品。
3.洗滌:依次用真菌毒素清洗緩沖液(含氯化鈉、碳酸氫鈉及吐溫-20)和純水淋洗,去除未結合雜質。此步驟需控制流速為1-2滴/秒,避免抗體-抗原復合物脫落。
4.洗脫:用1.5mL色譜級甲醇洗脫OTA,收集洗脫液并稀釋后,可直接用于HPLC或LC-MS/MS檢測。整個過程僅需15-20分鐘,回收率穩定在90%-110%之間。
赭曲霉毒素A免疫親和柱優勢與挑戰:高效與規范的平衡
其優勢在于其高特異性、高靈敏度和操作簡便性,但需嚴格遵循規范以保障結果準確性:
1.優勢:單次處理成本低,適合大規模篩查;無需復雜儀器,降低檢測門檻;柱體設計兼容自動化設備,提升通量。
2.挑戰:需控制上樣pH(6-8)和溫度(室溫),避免抗體活性下降;使用后需用5%次氯酸鈉溶液浸泡容器,防止交叉污染;儲存條件苛刻(2-8℃),運輸需避光、常壓。
